左旋 DNA 是 DNA 分子的镜像,其物理特性与右旋 DNA 一样,但是它不参与大多数生物反应。因此,当带有荧光标记的左旋 DNA 被添加至 PCR 样本中,它会以相同的方式(变性、退火)提供荧光信号反映分子反应信息、
为了验证他们的设想,Adams 和 Haselton 联合物理系助理教授 William Gabella 一起创建了一个适应性 PCR 设备原型(如下图),并进行相关验证试验。
手持式 PCR 仪:左边是紫外激光器,由它照射中间的样本,右边的分光光度计负责检测样本中荧光水平的变化,从而控制 DNA 复制过程。
Adams 表示:“现有的 PCR 仪器非常挑剔。我们实验室配备有 3 台 PCR 仪。当我们将相同的样本放入 3 台仪器中,只有两台仪器正常工作。当我与仪器公司的技术人员反映这一问题时,她询问我仪器周围是否有八英尺厚的墙壁?我回复说是的。她解释是因为这堵墙干扰了气流,从而对仪器运行造成影响。当然,事实证明她是对的,因为当我把仪器移出来,它又开始正常工作了!”
技术人员对一系列可能的问题提出应对之策:仪器需放置在温度可控的房间;DNA 样本需要纯化…… 即便如此,它仍然需要实验人员耗费时间优化反应条件。
现在,适应性方法能够控制 PCR 过程,有望简化操作、提高准确性、降低其对环境的敏感性,减少仪器大小(从台式到手持)。
适应性 PCR 借助荧光标记的左旋 DNA 确定理想的变性和退火温度,从而规避了所有变量。
左旋 DNA 序列可以通过商业合成获得,其序列与需要扩增的 DNA 序列一样,而且左旋 DNA 的两条链上分别标记上一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团(当两条链完整时,淬灭基团会吸收报告基团发出的荧光信号)。