23.固定液的选择：
①按极性相似原则选择：
极性相似，溶解度大，分配系数大，保留时间长；
②按官能团相似选择：
酯类——酯或聚酯类固定液；
醇类——聚乙二醇固定液。
③按主要差别选择：
各组分间沸点是主要差别——非极性固定液；极性为主要差别——极性固定液。
④选择混合固定液：
对于难分离的复杂样品，可选用两种或两种以上固定液。
24.聚合物固定相：
既可作为固体固定相，也可作为载体，又称高分子多孔微球。物质在其表面既存在吸附作用，又存在溶解作用。
(1)具有较大的比表面积，表面孔径均匀；
(2)对非极性及极性物质无有害的吸附活性，拖尾现象小，极性组分也能出对称峰；
(3)由于不存在液膜，无流失现象，热稳定性好；
(4)机械强度和耐腐蚀性较好，系均匀球形，在填充柱色谱中均匀性、重现性好，有助于减少涡流扩散。
25.载气种类的选择：
检测器的适应性，载气流速的大小。
26.柱温的选择：
(1)首先应使柱温控制在固定液的最高使用温度(超过该温度固定液易流失)和最低使用温度(低于此温度固定液以固体形式存在)范围之内。
(2)提高柱温，可以改善传质阻力，有利于提高柱效，缩短分析时间，但降低了容量因子和选择性，不利于分离。一般的原则是：在使最难分离的组分尽可能分离的前提下，尽量采用较低的柱温，但以保留时间适宜，峰形不拖尾为度。
(3)柱温一般选择在接近或略低于组分平均沸点时的温度。
(4)组分复杂，沸程宽的试样，采用程序升温。
27.载体和固定液含量的选择：
配比：
固定液在载体上的涂渍量，一般指的是固定液与担体的百分比，填充柱的配比通常在5%～25%之间。
配比越低，担体上形成的液膜越薄，传质阻力越小，柱效越高，分析速度也越快。配比较低时，固定相的负载量低，允许的进样量较小。分析工作中通常倾向于使用较低的配比。
28.进样条件的选择：
进样量应控制在柱容量允许范围及检测器线性检测范围之内，进样要求动作快、时间短，汽化室一般较柱温高30~70°C。
29.提高色谱分离能力的途径：
(1)塔板理论：
增加柱长，减小柱径，即增加柱子塔板数；
(2)速率理论：
减小组分在柱中的涡流扩散和传质阻力，可降低塔板高度。
30.毛细管色谱柱的结构特点：
(1) 不装填料阻力小，长度可达百米的毛细管柱，管径0.2mm；
(2)气流单途径通过柱子，消除了组分在柱中的涡流扩散；
(3)固定液直接涂在管壁上，总柱内壁面积较大,涂层很薄，则气相和液相传质阻力大大降低。
(4)毛细管色谱柱柱效高达每米3000～4000块理论塔板，一支长度100米的毛细管柱，总的理论塔板数可达104～106。
31.毛细管色谱具有以下优点：
(1)分离效率高：
比填充柱高10～100倍；
(2)分析速度快：
用毛细管色谱分析比用填充柱色谱速度；
(3)色谱峰窄、峰形对称，较多采用程序升温方式；
(4)灵敏度高，一般采用氢焰检测器。
(5)涡流扩散为零。
32.毛细管色谱的类型：
(1)涂壁毛细管柱：
将固定液直接涂敷在管内壁上。柱制作相对简单，但柱制备的重现性差、寿命短。
(2)多孔层毛细管柱：
在管壁上涂敷一层多孔性吸附剂固体微粒，构成毛细管气固色谱。
(3)载体涂渍毛细管柱：
将非常细的担体微粒粘接在管壁上，再涂固定液。柱效较涂壁毛细管柱高。
(4)化学键合或交联毛细管柱：
将固定液通过化学反应键合在管壁上或交联在一起。使柱效和柱寿命进一步提高。
高效液相色谱法
1.与气相色谱相比液相色谱的优点
与气相色谱法相比，液相色谱法不受样品挥发性和热稳定性及相对分子质量的限制，只要求把样品制成溶液即可，非常适合于分离生物大分子、离子型化合物，不稳定的天然产物以及其他各种高分子化合物等。此外，液相色谱的流动相不仅起到使样品沿色谱柱移动的作用，而且与固定相一样，与样品分子发生选择性的相互作用，这就为控制和改善分离条件提供了一个额外的可变因素。而气相色谱法采用的流动相是惰性气体，对组分没有亲和力，仅起运载作用。
2.液相色谱特点：
高压、高速、高效、高灵敏度、高沸点、热不稳定有机及生化试样的高效分离分析方法。
3.高效液相相色谱仪的组成：
高压输液系统、进样系统、分离系统、检测系统、数据处理系统。
4.流动相使用前必须脱气：
常用的脱气方法有：
低压脱气法(电磁搅拌、水泵抽空，可同时加热或向溶剂吹氮气)、吹氦气脱气法和超声波脱气法等。
5.梯度洗脱：
用两种(或多种)不同极性的溶剂，在分离过程中按一定程序连续改变流动相中溶剂的配比和极性，通过流动相中极性的变化来改变被分离组分的分离因素，以提高分离效果。
